Reactivi pentru purificarea și izolarea acizilor nucleici synthol. Compoziția trusei pentru izolarea ADN-ului „DNA-sorb-PCR” Set de reactivi pentru izolarea ADN-ului „ARN-Extran”

Soluție de liză 30 cm 3,

Soluție de spălare 1 30 cm 3,

Concentrat pentru soluție de curățare 2 20 cm 3,

Suspensie absorbanta 2 cm 3,

Tampon de eluare ADN 4 cm3.

Procedura de operare:

Se prepară soluția de curățare 2 amestecând 20 cm 3 de concentrat din trusă, 80 cm 3 de apă distilată și 100 cm 3 de etanol 96% într-o sticlă separată.

Păstrați soluția la temperatura camerei într-o sticlă bine înșurubat.

Verificați starea sorbantului - la decontare, acesta ar trebui să ocupe aproximativ jumătate din volumul suspensiei.

Într-un tub de polipropilenă de 1,5 cm 3 bine închis (de preferință cu un capac filetat), se adaugă 100 µl dintr-o probă de testare pre-preparată, probă negativă sau pozitivă, se adaugă 300 µl de soluție de liză (la fiecare probă cu un vârf separat) și se amestecă bine prin pipetare de 3-10 ori.

Se adaugă 15 - 20 µl de sorbent resuspendat, se amestecă bine prin vortex, se pune într-un trepied timp de 5-7 minute pentru sedimentarea completă a sorbantului.

Sedimentează sorbentul într-o microcentrifugă timp de 30 de secunde la 3-8 mii rpm. Luați supernatantul din fiecare tub folosind un vârf separat (este convenabil să utilizați o aspirație cu vid).

Adăugați 300 μl de soluție de spălare 1, agitați până când sorbentul este complet resuspendat (dacă sorbentul se descompune rău, spargeți-l cu o pipetă), sedimentați într-o centrifugă la 4-8 mii rpm timp de 30 de secunde. Se colectează supernatantul din fiecare tub folosind un vârf separat.

Adăugați 800 μl de soluție de spălare 2, agitați până când sorbentul este resuspendat complet, sedimentați într-o microcentrifugă la 6-10 mii rpm timp de 30 de secunde și colectați supernatantul.

Repetați pasul 6, selectați cu atenție supernatantul, uscați sedimentul sorbant într-un termostat la 65 °C timp de 5 minute.

Resuspendați sorbantul în 30-40 μl de tampon de eluție, plasați într-un termostat la 65°C timp de 5 minute, agitând periodic prin vortex.

Sedimentul într-o microcentrifugă la viteză maximă timp de 1 minut.

Proba este gata pentru PCR; supernatantul conține ADN purificat.

Eficiența extracției ADN folosind kitul DNA-sorb-PCR este de 30 – 60%.

Material clinic	Plasmă, ser	Razuire, spermatozoizi, spalaturi faringiene, urina	Biopsie, sânge, fecale
Numărul de pipete
Volumul absorbant
Rata de depunere a absorbantului	8 mii rpm	6 mii rpm	3-4 mii rpm
Volumul de eluent
Eficiența extracției ADN

5.2. Etapa 2. Stabilirea compoziției PCR a trusei pentru amplificarea PCR:

5x tampon de reacție 1000 µl (soluție vâscoasă, transparentă)

Apă deionizată.2000 µl

Amestec de nucleotide.500 µl

Taq polimerază.100 µl

Amestecul de amorsare.500 µl

Ceară pentru PCR.2000 µl

Martor pozitiv: 100 µl

Control negativ 100 µl

Ulei mineral 4000 µl

Trusa se păstrează la minus 20°C timp de un an.

Metoda de extracție rapidă a ADN-ului pe microcoloană este concepută pentru extragerea ADN-ului total din sânge, plasmă, saliva, urină, culturi celulare și orice pelete de celule din tampon. Puritatea ridicată a ADN-ului izolat îi permite să fie utilizat pentru toate tipurile de analiză.

timpul de izolare variază de la 30 la 45 de minute, în funcție de numărul de probe;

• legarea eficientă a ADN-ului de membrana coloanei vă permite să obțineți cel mai mare randament de ADN din probă;
• se obține un grad ridicat de purificare datorită compoziției optimizate a componentelor soluțiilor de lizare și spălare;
• a redus semnificativ fragmentarea și pierderea ADN-ului în timpul spălării în comparație cu alte metode de extracție cu sorbant;
• este posibilă concentrarea ADN-ului prin reducerea volumului soluției de eluție;
• Extracția ADN-ului pe coloane reduce semnificativ consumul de plastic suplimentar;
• volum maxim de probă - 200 µl;
• trusa contine Proteinaza K;
• puritatea ADN-ului izolat este de 1,8-1,9 conform raportului A260/A280;
• cantitatea de ADN extrasă depinde de tipul și cantitatea de probă. Randamentul ADN din 200 µl de sânge este în medie de 5-6 µg.

Set de reactivi pentru izolarea ADN-ului genomic "DNA-Extran"

Folosind kituri pentru izolarea ADN-ului genomic din seria DNA-Extran, puteți izola ADN dintr-o varietate de materiale biologice: sânge, culturi de celule bacteriene și animale, țesuturi proaspete, congelate sau uscate de animale și plante.

• extragerea completă a ADN-ului din celule, minimizând pierderea și fragmentarea ADN-ului în timpul purificării;
• ADN-ul izolat are nivel înalt puritate (raport A260/A280 = 1,8-1,9) și potrivit pentru PCR, digestie de restricție, hibridizare și alte studii;
• kiturile nu conțin componente potențial periculoase, cum ar fi fenolul și cloroformul, nu necesită cantități mari de plastic și nu generează deșeuri toxice.

Set de reactivi pentru extracția ADN-ului pe particule magnetice „M-Sorb-Tube”

Adaptat pentru izolarea ADN-ului micobacterian din spută, spălături bronșice, lichid cefalorahidian, exudat, punctat, biopsie, urină, secreții ale tractului genital și culturi celulare. Preprocesarea materialului clinic se efectuează în conformitate cu procedurile standard pentru pregătirea probelor pentru studii microbiologice (Ordinul nr. 109 al Ministerului Sănătății al Federației Ruse din 21 martie 2003 „Cu privire la îmbunătățirea măsurilor anti-tuberculoză în Federația Rusă”, Anexa 11 „Instrucțiuni pentru metode unificate de studii microbiologice pentru detectarea, diagnosticarea și tratamentul tuberculozei”). Pentru a inactiva materialul clinic, vă recomandăm să utilizați soluția de inactivare A pe care am dezvoltat-o.

Soluția A ucide micobacteriile în decurs de 12 ore și dezinfectează materialul clinic, care poate fi folosit pentru analize ulterioare (extracția ADN, PCR etc.). Soluția A este adaptată special pentru tratamentul sputei și înlocuiește complet procedura standard folosind soluție NaOH-NALC și are proprietăți excepționale de mucolizare. Soluția de inactivare A crește randamentul ADN în comparație cu prepararea standard a probei NaOH-NALC.

Tehnica de izolare include: liza ADN-ului cu izotiocianat de guanidină, sorbția ADN-ului pe particule magnetice, precipitarea ADN-ului prin centrifugare, etapele de spălare și eluarea ADN-ului. Poate fi folosit pentru a izola ADN-ul de la alte microorganisme.

utilizarea particulelor magnetice acoperite cu gel de silice ca sorbent este un format mai avansat din punct de vedere tehnologic și mai convenabil în comparație cu alți sorbanți și permite standardizarea și automatizarea maximă a tehnicii de extracție a ADN-ului;

Un control pozitiv intern (IPC) este adăugat la fiecare probă de testare prezența/absența inhibitorilor RT-PCR și eficiența extracției ADN este determinată de reacția de amplificare IPC.

Truse de reactivi pentru extragerea ADN-ului din produse alimentare si materii prime alimentare

Kiturile de reactivi „Sorb-GMO-A” și „Sorb-GMO-B” sunt concepute special pentru extracția ADN-ului din materiale vegetale, produse alimentareși hrăniți. Ambele kituri folosesc sorbent de siliciu pentru purificarea ADN-ului. „Sorb-GMO-A” conține clorură de guanidină ca agent de lizare, „Sorb-GMO-B” este un detergent ionic CTAB, care asigură un randament maxim de ADN din componentele plantei. Caracteristici distinctive Avantajele trusei Sorb-GMO-A sunt viteza de extracție a ADN-ului și absența cloroformului, ceea ce face ca lucrul cu kitul să fie mai sigur.

Set de reactivi pentru extracția ADN din probe de apă (pe particule magnetice) "M-Sorb-Leg"

Proiectat pentru izolarea ADN-ului Legionella din corpuri de apă mediu(turnuri de răcire, piscine, parcuri acvatice, sisteme de alimentare cu apă caldă și rece). Concentrația minimă izolată de Legionella este de 100 de celule la 0,5 litri de probă.

Kitul „M-Sorb-Leg” este produs în două modificări: „M-Sorb-Leg1000” pentru probe de apă cu un volum de 1-1000 ml și „M-Sorb-Leg1” pentru probe de apă cu un volum de până la 1 ml. Setul M-Sorb-Leg1000 asigură filtrarea apei folosind un filtru din policarbonat.

setul de reactivi M-Sorb-Leg vă permite să scăpați de inhibitorii PCR prezenți în probele de apă puternic contaminate;

• Tehnica de izolare a ADN-ului se bazează pe sorbția ADN-ului pe particule magnetice acoperite cu gel de silice, urmată de precipitarea cu un reactiv de precipitare. Combină avantajele metodelor de sorbție și ale metodei de precipitare totală;
• Un control pozitiv intern (IPC) este adăugat la fiecare probă de testat prezența/absența inhibitorilor RT-PCR este determinată de reacția de amplificare IPC.

Set de reactivi pentru extragerea ADN-ului din obiecte din mediu (pe particule magnetice) "M-Sorb-OOM"

Setul de reactivi M-Sorb-OOM este destinat izolării ADN-ului din obiectele din mediu (sol, apă, cadavre de animale etc.) suspectate de a fi infectate cu microorganisme deosebit de periculoase (DOM), în vederea pregătirii acestora pentru analiza ulterioară prin RT-PCR. Procedura de izolare este similară cu cea descrisă pentru trusa M-Sorb-Leg.

Set de reactivi pentru izolarea ARN "ARN-Extran"

Setul este destinat izolării ARN din sânge, fragmente de țesut și culturi de celule. ARN-ul obținut folosind kitul ARN-Extran poate fi utilizat atât pentru RT-PCR, cât și pentru analiza hibridizării, traducerea in vitro și donarea.

Principiul izolării ARN se bazează pe extracția cu fenol acid conform lui Khomchinsky, în care faza apoasa rămâne doar ARN, iar ADN-ul în complex cu proteine ​​trece în faza organică. Tiocianatul de guanidină este utilizat ca agent de izolare și denaturare pentru nucleazele celulare.

vă permite să obțineți ARN înalt purificat, fără impurități de ADN;

asigură extracția completă de ARN din sânge integral, fragmente de țesut și culturi celulare;

vă permite să obțineți ARN nedeteriorat;

• Timp de izolare a ARN - 1 oră.

numărul de catalog	Nume	numarul de reactii
EX-509	Set de reactivi „DNA-Extran-1” pentru izolarea ADN-ului genomic din sângele integral	100
EX-511	Set de reactivi „DNA-Extran-2” pentru extracția ADN din țesuturi animale și umane	100
EX-512	Set de reactivi „DNA-Extran-3” pentru extracția ADN din culturi bacteriene	100
EX-513	Set de reactivi „DNA-Extran-4” pentru extracția ADN din țesuturi vegetale	100
EX-514	Set de reactivi „K-Sorb” pentru izolarea ADN-ului total pe coloane (din sânge, salivă, urină, culturi celulare, răzuire de celule epiteliale)	100
EX-515	Set de reactivi "ARN-Extran" pentru izolarea ARN din sange, tesuturi, culturi celulare	50
OM-505	Set de reactivi „M-Sorb-Tub” pentru extracția ADN din probe clinice și culturi celulare (pe particule magnetice)	50 sau 100
GM-502-50	„SORB-GMO-A” (guanidină + sorbent) Set de reactivi pentru extracția ADN din materiale vegetale și produse alimentare	50
GM-503-50	„SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Set de reactivi pentru extracția ADN din materiale vegetale și produse alimentare	50
OM-506	Set de reactivi „M-Sorb-Leg1000” pentru izolarea ADN-ului Legionella din probe de apă de până la 1000 ml (pe particule magnetice, filtrele sunt furnizate separat)	50 sau 100
OM-507	Set de reactivi „M-Sorb-Leg1” pentru izolarea ADN-ului Legionella din probe de apă cu volum de până la 1 ml (pe particule magnetice)	50 sau 100
OOM-502	Set de reactivi „M-sorb-OOM” pentru extracția ADN din obiecte din mediu (pe particule magnetice)	50 sau 100

Informații de comandă

Nume	Volum	Productie	Metodă	Cat.Nr.
„GMO-MagnoSorb” (guanidină + sorbent magnetic) Set de reactivi pentru extracția ADN din materiale vegetale și produse alimentare	50 de alocări	Synthol	PCR în timp real	GM-505-50
„SORB-GMO-A” (guanidină + sorbent) Set de reactivi pentru extracția ADN din materiale vegetale și produse alimentare	50	Synthol	PCR în timp real	GM-502-50-50
„SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Set de reactivi pentru extracția ADN din materiale vegetale și produse alimentare	50	Synthol	PCR în timp real	GM-503-50-50
Set de reactivi „Amplitub-RV” Kit Nr. 1 („M-Sorb-Tub“) pentru izolarea ADN-ului micobacterian din probe clinice și celule de cultură (pe particule magnetice)	50	Synthol	PCR în timp real	OM-505
Set de reactivi „DNA-Extran-1” pentru izolarea ADN-ului genomic din sângele integral	100	Synthol	PCR în timp real	EX-509-100
Set de reactivi „DNA-Extran-2” pentru extracția ADN din țesuturi animale și umane	100	Synthol	PCR în timp real	EX-511
Set de reactivi „DNA-Extran-3” pentru extracția ADN din culturi bacteriene	100	Synthol	PCR în timp real	EX-512-100
Set de reactivi „DNA-Extran-3” pentru extracția ADN din țesuturi vegetale	100	Synthol	PCR în timp real	EX-513-100
Set de reactivi „K-Sorb” pentru izolarea ADN-ului total pe coloane (din sânge, salivă, urină, culturi celulare, răzuire de celule epiteliale)	100	Synthol	PCR în timp real	EX-514-100
	48 de reacții	Synthol	PCR în timp real	GM-443-48
Set de reactivi „Soia / 35S+FMV / NOS screening”	50 de reacții	Synthol	PCR în timp real	GM-416-50

„DNA-sorb-S-M” ® AmpliSens FBUN Institutul Central de Cercetare de Epidemiologie din Rospotrebnadzor, numai pentru cercetare Federația Rusă, 111123 și alte scopuri non-medicale, Moscova, ... "

INSTRUCŢIUNI

privind utilizarea trusei de reactivi

pentru extragerea ADN-ului din material biologic

"ADN-sorb-S-M"

AmpliSense

FBUN Institutul Central de Cercetare de Epidemiologie

Rospotrebnadzor,

Numai în scopuri de cercetare

Federația Rusă, 111123,

și alte scopuri non-medicale

Orașul Moscova, strada Novogireevskaya, clădirea 3A

LISTA ABREVIERILOR

SCOP

PRINCIPIUL METODEI

FORME DE COMPLETARE

EXTRACȚIA ADN-ULUI DIN MATERIAL BIOLOGIC DIN ANIMALE................ 8

Hrana pentru animale SAU MATERIALE PRIME VEGETALE

SIMBOLULE UTILIZATE ÎN PRODUSE IMPRIMATE

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 2 din 15

LISTA ABREVIERILOR

În acest manual, sunt utilizate următoarele abrevieri și simboluri:

ADN – acid dezoxiribonucleic NA – acizi nucleici OK – control negativ de extracție NCO – eșantion de control negativ PC – control de extracție pozitiv PKO – eșantion de control pozitiv PCR – reacție în lanț a polimerazei

– Federală institutie bugetaraştiinţă

Institutul Central de Cercetare FBUN

„Institutul Central de Cercetare de Epidemiologie și Epidemiologie” Serviciul federal pentru supravegherea în domeniul Rospotrebnadzor pentru protecția drepturilor consumatorilor și bunăstării umane

SCOP

Trusa de reactivi DNA-sorb-S-M este destinata extragerii ADN din material biologic de la animale: material tisular (biopsie (piele si mucoase ale sistemului genito-urinar, tract gastrointestinal, bronhii), material chirurgical si autopsie); și extragerea ADN-ului din produse alimentare, aditivi biologici, hrană pentru animale sau materiale vegetale pentru cercetări ulterioare folosind metoda polimerazei reacţie în lanţ(PCR).

Extracția ADN-ului este o procedură preanalitică a metodei PCR.

Volumul probei de testat pentru extracție: 100 µl (sunt permise probe cu un volum de 10 până la 100 µl sau cu o greutate de la 10 la 100 mg)1.

ATENŢIE! Pentru informații despre procedura de colectare, condițiile de transport și depozitare a materialului de testat, necesitatea și procedura de pregătire a acestuia pentru extracția ADN-ului, precum și informații despre substanțele interferente și restricțiile asociate probei, consultați instrucțiunile pentru trusa de reactivi de amplificare. folosit.

PRINCIPIUL METODEI

Proba de testat2 este tratată cu o soluție de liză care conține proteinază K, rezultând distrugerea membranelor celulare și eliberarea de NK și componente celulare. NC dizolvate se leagă de particulele de sorbent, în timp ce alte componente ale materialului de testat lizat rămân în soluție și sunt îndepărtate în timpul precipitării sorbantului. În funcție de materialul testat, consultați instrucțiunile pentru kitul de reactiv de amplificare utilizat.

Unele tipuri de material biologic necesită o etapă de pregătire a probei. Cm.

instrucțiuni pentru trusa de reactivi utilizată pentru amplificare.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / pagina 3 din 15 prin centrifugare și spălarea ulterioară a sorbantului. Când se adaugă un tampon de eluție la sorbent, NC trece de la suprafața silicei în soluție, care este separată de particulele de sorbent prin centrifugare. În urma acestei proceduri, se obține un preparat de NA foarte purificat, lipsit de inhibitori ai reacției de amplificare, ceea ce asigură o sensibilitate analitică ridicată a studiului PCR.

FORME DE COMPLETARE

Setul de reactivi este disponibil în 2 configurații:

Formularul 1 include un set de reactivi „DNA-sorb-S-M” versiunea 50.

Forma 2 include un set de reactivi „DNA-sorb-S-M” versiunea 100.

PRECAUȚII ȘI INFORMAȚII PRIVIND ELIMINAREA

Când se studiază materialul biologic de la animale, munca trebuie efectuată în conformitate cu regulile Ministerului Agriculturii și Petrolului al Federației Ruse din 27 ianuarie 1997 nr. 13-7-2/840 „Reguli pentru efectuarea lucrărilor în laboratoare de diagnostic folosind metoda reacției în lanț a polimerazei. Prevederi de bază”, aprobate de Departamentul de Medicină Veterinară.

Atunci când se cercetează produse alimentare, aditivi biologici, hrană pentru animale sau materiale vegetale, lucrările trebuie efectuate în conformitate cu cerințele instrucțiuni metodologice MU 1.3.2569-09 „Organizarea muncii laboratoarelor folosind metode de amplificare acizi nucleici atunci când lucrați cu materiale care conțin microorganisme din grupele de patogenitate I–IV” și GOST R 53214-2008 „Produse alimentare. Metode analitice pentru detectarea organismelor modificate genetic și a produselor derivate din acestea.

Cerințe generale și definiții.”

Când lucrați, trebuie să respectați întotdeauna următoarele cerințe:

– Procesul de laborator trebuie să fie unidirecțional. Analiza se efectuează în încăperi (zone) separate. Lucrările ar trebui să înceapă în Zona de Extracție și să continue în Zona de Amplificare și Detectare. Nu returnați mostre, echipamente sau reactivi în zona în care a fost efectuată o etapă anterioară a procesului.

– Reactivi neutilizați, reactivi expirați, precum și Formularul 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 4 din 15 reactivi utilizați, ambalaje3, material biologic, inclusiv materiale, instrumente și articole contaminate material biologic trebuie eliminate în conformitate cu cerințele SanPiN 2.1.7.2790-10 „Cerințe sanitare și epidemiologice pentru gestionarea deșeurilor medicale”.

– Folosiți și schimbați vârfurile de unică folosință pentru pipetele cu filtru automat la fiecare operație4. De unică folosință vase de plastic trebuie aruncat într-un recipient special care conține un dezinfectant care poate fi folosit pentru dezinfecție deșeuri medicale.

– Vasele (mortare și pistil) și instrumentele metalice (bisturiu, foarfece, pensete, accesorii pentru blender etc.) utilizate pentru pregătirea prealabilă a probei se păstrează într-o soluție dezinfectantă (de exemplu, soluție 0,2% de sare de sodiu a acidului dicloroizocianuric) pt. o oră, se spală cu apă de la robinet cu detergenți surfactanți și, după spălarea în apă curentă și deionizată, se usucă într-un cuptor cu căldură uscată timp de 4 ore la o temperatură de 180 C.

– Setul de reactivi este destinat utilizării unice pentru a efectua studiul numărului specificat de probe (vezi secțiunea „Compoziție”).

– Trusa de reactivi este gata de utilizare conform acestor instrucțiuni.

Utilizați kitul de reactivi strict în scopul pentru care a fost prevăzut.

– Nu utilizați trusa de reactivi dacă ambalajul interior este deteriorat sau aspect Reactivul nu corespunde descrierii.

– Nu utilizați trusa de reactivi dacă nu sunt respectate condițiile de transport și depozitare conform instrucțiunilor.

Reactivii neutilizați, reactivii expirați, reactivii uzați, ambalajele aparțin clasei de pericol a deșeurilor medicale G.

Vârfurile de unică folosință fără filtru sunt folosite pentru a îndepărta supernatantul în timpul procesului de extracție folosind un aspirator cu vid.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 5 din 15

– Nu utilizați trusa de reactivi după data de expirare.

– Folosiți mănuși de unică folosință fără pudră, haine de laborator și protecție pentru ochi atunci când lucrați cu mostre și reactivi. Spălați-vă bine mâinile după terminarea lucrului. Toate operațiunile se efectuează numai cu mănuși pentru a evita contactul cu corpul uman.

– Evitati inhalarea vaporilor, contactul cu pielea, ochii si mucoasele, nu inghititi. În caz de contact, clătiți imediat zona afectată cu apă și, dacă este necesar, solicitați sfatul medicului. îngrijire medicală.

– Fișele cu date de securitate pentru reactiv (SDS – fișă cu date de securitate) sunt disponibile la cerere.

Evaluarea evenimentelor probabile care pot avea ca rezultat consecințe negative pentru corpul uman:

Atunci când este utilizat conform prevederilor și sunt respectate măsurile de mai sus, contactul cu corpul uman este exclus.

La situatii de urgenta este posibil urmatorul:

– iritarea membranei mucoase a ochilor la persoanele sensibile,

– iritarea pielii la persoanele sensibile,

– reactie alergica,

– vătăm dacă este inhalat,

- Daunator daca este administrat oral.

Efecte specifice ale trusei de reactivi asupra corpului uman:

– Nu există efect cancerigen.

– Nu există efect mutagen.

– Fără toxicitate pentru reproducere.

MATERIALE ȘI ECHIPAMENTE SUPLIMENTARE

(indicand producatorii/furnizorii):

1. Tuburi din polipropilenă de unică folosință de 1,5 și 5,0 ml cu înșuruburi sau cu etanșare etanșă (de exemplu, Axygen, Inc.

("Exigen, Inc"), SUA sau similar).

2. Vârfuri de unică folosință pentru pipete cu volum variabil cu un filtru de până la 200 și până la 1000 µl (de exemplu, Axygen, Inc., SUA sau similar).

3. Vârfuri de unică folosință pentru pipete cu volum variabil de până la 200 µl (de exemplu, Axygen, Inc., SUA sau similar).

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 6 din 15

4. Rafturi pentru tuburi de 1,5 ml (de exemplu, Axygen, Inc., SUA sau similar).

5. Hotă cu flux laminar, clasa de siguranță biologică II tip A (de exemplu, „BAVp-01-“Laminar-S”-1,2”, JSC „Laminar Systems”, Rusia sau similar).

6. Termostat pentru tuburi Eppendorf de la 25 la 100 °C (de exemplu, SIA Biosan, Letonia sau similar).

7. Agitator-termostat pentru tuburi Eppendorf de la 25 la 100 °C (de exemplu, TS-100, SIA Biosan, Letonia sau similar).

8. Microcentrifuga pentru tuburi Eppendorf cu viteza maxima centrifugare de cel puțin 12 mii g (de exemplu, MiniSpin, Eppendorf (Eppendorf Manufacturing Corporation), Manufacturing Corporation Germany sau similar).

9. Vortex (de exemplu, SIA Biosan, Letonia sau similar).

10. Aspirator medical cu vid cu un balon cu capcană pentru îndepărtarea lichidului supernatant (de exemplu, „OM-1”, LLC „Utes”, Rusia sau similar).

11.Dozatoare automate cu volum variabil (de exemplu, Biohit LLC, Rusia sau similare).

12. Frigider de la 2 la 8 °C cu congelator de la minus 24 la minus 16 C.

13. Halat, pălării, pantofi și mănuși de unică folosință separate conform MU 1.3.2569-09.

14.De unică folosință recipiente din plastic pentru eliminarea și inactivarea materialelor.

–  –  –

EXTRACȚIA ADN-ULUI DIN MATERIAL BIOLOGIC DIN ANIMALE

2. Selectați cantitatea necesară Tuburi de polipropilenă de unică folosință de 1,5 ml cu șuruburi sau capace etanșe (inclusiv controale de extracție negative și pozitive, dacă sunt prevăzute pentru testarea PCR).

La depozitarea tamponului de reactiv de liză și a soluției de spălare 1 la temperaturi de la 2 la 8 C, este posibilă formarea unui precipitat sub formă de cristale.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 8 din 15

3. Adăugați 10 µl de BKO6 în fiecare tub (dacă este furnizat pentru cercetarea PCR). Adăugați 400 µl de tampon de reactiv de liză și 17 µl de reactiv de liză în tuburi.

4. Adăugați 100 µl de probe de testat6 în tuburile pregătite, folosind un vârf separat cu un filtru pentru fiecare probă.

ATENŢIE! 400 µl de tampon pentru reactiv de liză și 17 µl de reactiv de liză pot fi adăugați într-un tub cu cantitatea necesară de probă de testat și 10 µl de BKO7 pot fi adăugați acolo (dacă este prevăzut pentru cercetarea PCR), folosind vârfuri separate cu un filtru.

5. Adăugați 100 μl de NCO în tubul de extracție cu control negativ (NC), adăugați 90 μl de NKO și 10 μl de PCO în tubul de extracție cu control pozitiv (PC) (dacă sunt prevăzute controale de extracție pentru studiile PCR).6

6. Închideți bine capacele, amestecați bine și agitați picăturile.

Puneți tuburile într-un termostat cu o temperatură de 64 °C timp de 1 oră, amestecând periodic prin vortex (de 5 ori la fiecare 10-12 minute). Se lasă incubarea timp de 12 ore la o temperatură de 60 °C.

7. Peletează particulele de probă nedizolvate prin centrifugare timp de 5 minute la 10 mii g (de exemplu, 12 mii rpm pentru o microcentrifugă MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).

8. Luați lichidul supernatant într-un volum de 200–350 µl cu mare atenție (evitând particulele în suspensie și picăturile de grăsime) folosind vârfuri separate cu filtre și transferați în tuburi noi. Sedimentează picăturile prin vortex.

9. Resuspendați sorbentul universal, amestecând energic folosind un vortex. Adăugați 25 µl de sorbent universal resuspendat în fiecare tub cu un vârf separat, închideți bine capacele.

Se amestecă prin vortex, se lasă pe un grătar timp de 10 minute, amestecând la fiecare 2 minute.

Este posibilă modificarea volumului probelor de test și de control, consultați instrucțiunile pentru setul de reactivi utilizat pentru amplificare.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 9 din 15

18.Repetați procedura de spălare din următoarele paragrafe. 15–16, îndepărtați complet supernatantul.

19. Așezați eprubete cu capacele deschiseîntr-un termostat cu o temperatură de 64 °C timp de 5-10 minute pentru a usca sorbentul universal.

20. Adăugați 50–100 μl de tampon de eluție B în tuburi (consultați instrucțiunile pentru kitul de reactivi de amplificare utilizat).

Se amestecă prin vortex până când sorbentul este resuspendat complet. Puneți într-un termostat la 64 °C timp de 5-10 minute, amestecând periodic (o dată pe minut) folosind un vortex.

ADN-ul purificat poate fi păstrat la o temperatură de 2 până la 8 °C timp de o săptămână, la o temperatură de minus 24 până la minus 16 °C timp de 6 luni și la o temperatură care nu depășește minus 68 °C timp de un an. Pentru a face acest lucru, este necesar, fără a capta sorbentul, să transferați lichidul supernatant într-o eprubetă nouă.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 10 din 15

EXTRACȚIA ADN-ULUI DIN ALIMENTE, ADITIVI BIOLOGICI,

Hrana pentru animale SAU MATERIALE PRIME VEGETALE

ATENŢIE! Pentru procedura de pregătire a materialului biologic pentru extracția ADN-ului și volumul probei de testat, consultați instrucțiunile pentru trusa de reactivi de amplificare utilizat.

1. Se încălzește tamponul de reactiv de liză și se spală soluția 1, dacă au fost păstrate la o temperatură de 2 până la 8 °C, la o temperatură de 64 °C, până când cristalele sunt complet dizolvate.

2. Puneți tuburi de 1,5 ml cu probe de testare preprocesate într-un rack (pentru volumul/cantitatea probei, consultați instrucțiunile pentru trusa de reactivi de amplificare utilizat).

3. Pregătiți un tub de polipropilenă de unică folosință de 1,5 ml cu un capac înșurubat sau strâns pentru controlul negativ al extracției (EC). Adăugați 100 µl de OKO în eprubetă.

4. Adăugați 400 µl de tampon pentru reactiv de liză și 17 µl de reactiv de liză în eprubetele cu probe de testare și TC.

5. Închideți bine capacele, amestecați bine și agitați picăturile.

Puneți tuburile într-un termostat cu o temperatură de 64 °C timp de 1 oră, amestecând periodic prin vortex (de 5 ori la fiecare 10-12 minute) sau utilizați un termostat agitator.

6. Peletează particulele de probă nedizolvate prin centrifugare timp de 5 minute la 10 mii g (de exemplu, 12 mii rpm pentru o microcentrifugă MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).

7. Selectați numărul necesar de tuburi noi de unică folosință din polipropilenă de 1,5 ml, cu șuruburi sau capace strânse.

8. Resuspendați sorbentul universal, amestecând energic folosind un vortex. Adăugați 25 µl de sorbent universal resuspendat în fiecare tub cu un vârf separat, închideți bine capacele.

9. Din tuburile cu probe lizate, se ia lichidul supernatant într-un volum de 200–350 µl cu foarte mare atenție (evitând pătrunderea particulelor în suspensie și a picăturilor de grăsime) folosind vârfuri separate cu filtre și se transferă în tuburi cu sorbent. Se amestecă prin vortex, se lasă pe un grătar timp de 10 minute, amestecând la fiecare 2 minute.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27/12/16 / pagina 11 din 15

10.Centrifugați tuburile într-o microcentrifugă timp de 1 minut la 2 mii g (de exemplu, 5 mii rpm pentru o microcentrifugă MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).

11. Fără a capta sorbentul, îndepărtați lichidul supernatant din fiecare tub cu un vârf separat fără un filtru de 200 µl, folosind un aspirator cu vid.

12.Adăugați 300 μl de soluție de spălare 1 în eprubete, închideți bine capacele și agitați până când sorbentul universal este resuspendat complet.

13.Centrifugați tuburile într-o microcentrifugă timp de 1 minut la 2 mii g.

14. Fără a capta sorbentul, îndepărtați lichidul supernatant din fiecare tub cu un vârf separat de 200 µl fără filtru, folosind un aspirator cu vid.

15.Adăugați 500 μl de soluție de spălare 2 în eprubete, închideți bine capacele și agitați până când sorbentul universal este resuspendat complet

16.Centrifugați tuburile într-o microcentrifugă timp de 1 minut la 7 mii g (de exemplu, 10 mii rpm pentru o microcentrifugă MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).

17. Fără a capta sorbentul, îndepărtați lichidul supernatant din fiecare tub cu un vârf separat de 200 µl fără filtru, folosind un aspirator cu vid.

18.Repetați procedura de spălare din următoarele paragrafe. 15-16, îndepărtați complet supernatantul.

19. Puneți eprubetele cu capace deschise într-un termostat cu o temperatură de 64 °C timp de 5-10 minute pentru a usca sorbentul universal.

20. Adăugați 50 µl de tampon de eluție B în eprubete. Se amestecă prin vortex până când sorbentul este resuspendat complet. Puneți într-un termostat la 64 °C timp de 5-10 minute, amestecând periodic (o dată pe minut) folosind un vortex.

21.Centrifugați tuburile într-o microcentrifugă timp de 1 minut la 10 mii g. Supernatantul conține ADN purificat. Probele sunt gata pentru PCR.

ADN-ul purificat poate fi păstrat la temperaturi de la 2 la 8 °C timp de o săptămână, la temperaturi de la minus 24 la minus 16 °C timp de 6 luni și la temperatură Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/ 16 / pagina 12 din 15 nu mai mare de minus 68 °C pe tot parcursul anului. Pentru a face acest lucru, este necesar, fără a capta sorbentul, să transferați lichidul supernatant într-o eprubetă nouă.

PERIOADA DE VALITARE, CONDIȚII DE TRANSPORT ȘI DEPOZITARE.

Cel mai bun înainte de data. 12 luni Trusele de reactivi expirate nu pot fi utilizate. Data de expirare a reactivilor deschisi corespunde cu data de expirare indicata pe etichetele pentru reactivii nedeschisi, cu exceptia cazului in care se stie altfel in instructiuni.

Transport. Setul de reactivi trebuie transportat la o temperatură de 2 până la 8 C timp de cel mult 5 zile în recipiente termice care conțin elemente reci, acoperite de toate tipurile. vehicule. La primire, dezasamblați în conformitate cu temperaturile de depozitare specificate.

Depozitare. Depozitați trusa de reactivi la o temperatură de 2 până la 25 C, cu excepția reactivului de liză. Păstrați reactivul de liză la frigider la o temperatură de 2 până la 8 C.

Camerele frigorifice trebuie să asigure condiții de temperatură reglată.